Медицина и здравоохранение сегодня

Практическое использование ПЦР

Учебные материалы / Использование молекулярно-генетических методов в методико-биологических исследованиях / Практическое использование ПЦР

Страница 1

Определение этиологии инфекции (т.е. какой именно микроорганизм или их сочетание вызвали воспалительный процесс). Для некоторых возбудителей, например, Mycoplasma genitallium (010102), ПЦР - это единственный метод диагностики на сегодняшний день. В зависимости от ответа на данный вопрос вырабатывается тактика лечения (Бутенко, 2005).

Определение количества возбудителя. Особенно это актуально для условно-патогенных микроорганизмов (Gardnerella vaginalis (010202) и др.), которые вызывают патологию только при определенных условиях (например, при повышении концентрации).

Осуществление контроля течения инфекционного процесса и оценка эффективности лечения. Однако необходимо учитывать тот факт, что ПЦР может улавливать даже единичные фрагменты ДНК, которые могут оставаться некоторое время после лечения, в связи с чем, контроль эффективности проводимой терапии рекомендуется проводить не ранее чем через 2-3 недели после ее окончания.

Благодаря своей высокой чувствительности, ПЦР позволяет выявлять возбудителя даже при минимальном его содержании. Особенно это актуально при бессимптомном течении инфекционного процесса, вызванного безусловно-патогенными микроорганизмами (гонорея, трихомоноз (020201), хламидийная инфекция (010001)). Например, при хронической гонорее у женщин даже с помощью бактериологического метода часто не удается выявить гонококк, несмотря на имеющиеся симптомы хронического воспалительного процесса в шейке матки или уретре (Мухина, 2002).

Проводилось обследования 38 новорождённых детей с врождёнными пороками развития для выявления роли вируса краснухи в этиопатогенезе заболевания с использованием метода РТ-ПЦР. РНК вируса краснухи выделена у 65,8% новорождённых с пороками развития. Клиническая картина у детей с ВПР, инфицированных вирусом краснухи, соответствовала степени деформации жизненно важных органов и систем, а так же генерализованной форме внутриутробной инфекции и не имела специфических признаков. При инфицировании плода во время беременности и формировании ВПР не происходит элиминации вируса, а возникает течение хронического инфекционного процесса. Отсутствие специфических признаков врождённой краснушной инфекции требует исследования для обнаружения РНК вируса краснухи всех новорождённых с пороками развития и клиникой внутриутробной инфекции. Положительные результаты ПЦР были получены у 25 новорождённых (65,8%). В результате проведения РТ-ПЦР РНК вируса краснухи была выделена у детей с ВПС в 31,6% случаев, у детей с пороками ЦНС- в 15,8%, при аномалиях строения опорно-двигательного аппарата- в 7,9% и при МПР- в 10,5% случаев (относительно всех обследованных детей). При анализе отдельных групп больных установлено инфицирование вирусом краснухи в 66,7% у новорождённых детей с ВПС, 75% детей с пороками ЦНС,60% детей с аномалиями скелета и 57,1%- с МПР (Резник, 2005).

Тест-система для выявления РНК вируса Крымской-Конго геморрагической лихорадки методом ОТ-ПЦР.

Крымская геморрагическая лихорадка (КГЛ) - это острое вирусное природно-очаговое лихорадочное заболевание человека, характеризующееся общей интоксикацией, наличием выраженного геморрагического синдрома и высокой летальностью - от 10 до 50 % (в зависимости от пути передачи возбудителя).

Метод ПЦР позволяет выявлять нуклеиновые кислоты вирусов в клиническом материале в первые дни болезни, когда по причине отсутствия специфических антител серологические методы диагностики оказываются не эффективными. ПЦР можно применять также для идентификации выделенных вирусных штаммов и для выявления РНК вируса в полевом материале (Аристова, 2001).